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mRNA Realtime qPCR (實時熒光定量) 實驗服務
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 BioTNT 十五年real time PCR mRNA 檢測傾情服務!  優質服務品質回報社會!

BioTNT 生物技術服務部自從1999年成立以來,承接了超過5000個qPCR 技術服務項目,積累了廣泛的qPCR 定量檢測的經驗。

 

一、熒光定量PCR概述

 

聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction, PCR)自誕生之日起就決定了它不僅是一種高敏感、高特異的檢測核酸分子的定性方法,而且也是一個能對核酸分子進行精確定量的有力工具。

 

 

 

 

 

 

 

隨著分子生物學技術研究的不斷進展,定量PCR技術取得了突飛猛進的發展,實時定量PCR (real-time quantitative PCR)技術便是一種具有革命性意義的定量PCR技術。所謂實時定量PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程,對起始模板進行定量分析的方法。

  目前實時定量PCR作為一個極有效的實驗方法,已被廣泛地應用于分子生物學研究的各個領域,僅 2000-2001年,收錄在Medline上的以real-time PCR為關鍵詞的文章就達1000多篇。實時PCR技術較之以前的以終點法進行定量的PCR技術具有無與倫比的優勢。首先,它不僅操作簡便、快速高效,而且具有很高的敏感性和特異性。其次,由于是在封閉的體系中完成擴增并進行實時測定,大大降低了污染的可能性并且無須在擴增后進行操作。

   實時熒光定量PCR技術即是在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號實時監測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實 時熒光定量PCR避免了傳統PCR以終產物檢測定量產生的偏差,提高實驗的重復性。該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的 mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結果。 

  BioTNT為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務,全部實驗皆由BioTNT進行品質保證;實驗結束后,可以提供客戶完整的實驗數據;并可以有一次免費的技術培訓。

BioTNT mRNA QPCR  檢測使用的儀器
 
進行檢測使用的主要儀器為QPCR, BioTNT 使用life technology最新款的ViiA™ 7實時熒光定量PCR系統進行microRNA的QPCR 檢測。
 

ViiA™ 7實時熒光定量PCR系統在單一的高性能儀器上融合了您需要的所有實時熒光定量PCR特性,從而幫助您優化研究效率。ViiA™7系統具有簡單的工作流 程、直觀的軟件、觸控屏界面以及使誤操作降至最少的單鍵實驗方案,可提供出眾的重復性和最小的孔間和儀器間差異。

產率
ViiA™ 7系統適用于中等至高通量實時熒光定量PCR,可提升您的實驗室效率。
快速的加熱塊更換——前開門設計使熱循環加熱??櫚母槐淶酶菀?,無需移動旁邊的設備,如機械臂或計算機
簡單的觸摸屏界面——儀器觸摸屏提供了一鍵式實驗方案,可快速簡單地完成各種應用Assay的設置
自動化兼容性——ViiA™ 7系統結合了Applied Biosystems® Twister® II 機器人,使您在自動化環境下實現效率最大化

整合
可與TaqMan® Array微流體芯片和 Applied Biosystems® TaqMan® Assay完全兼容:實時熒光定量PCR分析的金標準,具有高靈敏度、高特異性和寬動態范圍。
384 孔通量且無需機器輔助——采用TaqMan® Array微流體芯片,無需移液機器人或復雜的移液裝置;只需加入您的樣本和預混液,即可在ViiA™ 7系統上運行
與全套 TaqMan® Assay 兼容——ViiA™ 7系統已經過優化,可用于所有TaqMan® Assay(包括 MicroRNA、蛋白質、非編碼 RNA 和Pri-miRNA Assay),從而獲得清晰簡潔的數據

性能
ViiA™ 7系統具有下列特點:
OptiFlex® 系統——增強型熒光檢測,可實現準確且靈敏的數據分析
最大程度的多重分析能力——6 個可自由組合的激發和發射濾光片通道,可實現最多的染料組合和最大的多重反應能力
靈活的數據采集——多種升降溫方法檢測形式為升降溫階段的熒光數據采集提供了更多的靈活性
精確定量——在單色反應中可檢測出低至1.5倍的拷貝數差異

ViiA™ 7軟件具有:
直觀的界面和創新的設計
便捷的自動化操作
更強大的數據分析
與高通量完全兼容

可擴展的軟件構架
提供可選的附加性能,可升級至現有軟件。
遵循美國聯邦法規第21章第11節(21 CFR Part 11)——可選的SAE???,提供記錄安全、審計和電子簽名信息,從而實現全方位的數據可追溯性
高分辨率熔解曲線(HRM)——采用內置的MeltDoctor™ 實驗方案和校準,您可以縮短優化運行的時間,從而將更多的時間用于分析您的結果。通過方便的軟件設置即可根據需要設置基因型種類的數目。

儀器

 

 

二、熒光定量化學原理介紹

 目前比較主流的有兩類,一類是特異性熒光探針法,以taqman 熒光探針為代表;

 一類是非特異的熒光染料法,這個以sybgreen 染料為代表。

TaqMan熒光探針
   PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告 基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統 可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。如圖所示。

 SYBR Green熒光染料
  SYBR Green是一種DNA結合染料,能摻入到雙鏈DNA中去。在游離狀態下,它不發出熒光,但一旦結合到雙鏈DNA中以后,便可以發出熒光。它的最大優點就是可以與任意引物、模板相配合,用于任意反應體系中。

 

 染料法的特點:經濟。因為可以通用,熒光染料PCR的使用成本比探針的價格要便宜得多。

但由于染料能與所有的雙鏈DNA結合,所以一旦反應體系中出現非特異擴增,那它就會影響到定量結果的可靠性與重復性。要避免這種不利因素,需要結合熔解曲線來判斷產物的特異性,并通過選擇良好的引物并優化反應條件以消除非特異性影響。采用sybr green 熒光染料法進行real time PCR 實驗,最重要的是熔解曲線和擴增曲線結合起來進行判斷。

三、BioTNT QPCR mRNA檢測服務樣品準備
  
 足量的并且保證純度的細胞或組織
 
  注意:BioTNT QPCR mRNA 檢測的樣本取樣同Real time PCR  microRNA的組織取樣與保存:
1、 取動物的組織,動作要求迅速,盡量避免樣本在環境中暴露太久;
2、 講樣本迅速放入無菌無酶的凍存管中,為保證質量,推薦選取Axygen,corning,nunc等國外品牌的凍存管;
3、 在凍存管上做好標記,盡量清晰易辨;在實驗記錄本上做好記錄,盡量詳細易查;
4、 將凍存管直接放入液氮中速凍;或加入1ml Trizol 到凍存管中,再放入液氮速凍;
5、 速凍2h 后,將凍存管從液氮轉至-80度冰箱,可以保存6個月左右;
 
BioTNT QPCR mRNA 檢測的樣本取樣同Real time PCR  microRNA的細胞取樣與保存
1、 懸浮細胞:500g 離心5min 取細胞,用PBS 清洗2-3遍,得細胞,并轉至放入凍存管中;
2、 加入1ml Trizol 到凍存管中,吹打混勻;
3、 在凍存管上做好標記,盡量清晰易辨;在實驗記錄本上做好記錄,盡量詳細易查;
4、 將凍存管放入液氮速凍,2h 后,轉至-80度冰箱,可以保存6個月左右;
盡量及早提取組織或細胞樣本中的RNA并逆轉錄為cDNA,因為即使凍存,降解仍然存在。
樣本運輸:液氮運輸
 
四、BioTNT  mRNA 檢測技術服務標準流程:
1、 客戶提供樣本(組織,細胞或者RNA),請參照取樣與保存;
2、 客戶提供檢測指標;
3、與客戶協商內參的選?。ㄈ?,大鼠,小鼠均有兩種內參可以采用);
4、客戶樣本驗證進行抽提,特異性逆轉錄,QPCR 檢測,驗證系統是否好用;
5、 客戶的大批量樣本進行處理,抽提和實驗。
 
實驗對象為組織樣品,組織量不是很少的情況下,可以采用trizol 法進行抽提。取適量(50-100mg)新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品加1ml的RNA抽提試劑Trizol(Invitrogen),勻漿后抽提RNA。
實驗對象為細胞樣品,細胞數量不是很少的情況下,可以采用trizol 法進行抽提。每份樣品取1×106~1×107細胞,PBS清洗細胞,去PBS加1ml的RNA抽提試劑Trizol(Invitrogen),裂解后抽提RNA。

 6、 RNA 特異性逆轉錄得到內參CDNA, 對樣本的質量進行驗證;

7、 大批量樣本real time PCR實驗;使用儀器為:ABI 公司的Vii7;
 
8、 靶基因表達水平結果分析,數據分析方法為:delta delta CT 法;也可以采用相對定量的標準曲線法;
 
9、 提供客戶實驗報告;包括方法,材料,設備,原始數據和計算數據的成套材料;
 
五、BioTNT real time PCR mRNA檢測技術服務收費標準

實驗步驟
 
樣本制備+驗證:
客戶提供組織或者細胞樣本;
組織樣本分為容易勻漿的樣本和難勻漿的樣本;
  
 

樣本處理費用      
樣本類型 實驗方法與要求 服務項目 單價
易勻漿組織或細胞 Trizol 法 總RNA抽提+逆轉錄+樣本驗證 80元/樣本
離心柱RNA 抽提試劑盒(Qiagen) 總RNA抽提+逆轉錄+樣本驗證 120元/樣
全血樣本 全血樣本,提供淋巴細胞分離細胞 總RNA抽提+逆轉錄+樣本驗證 120元/樣
全血樣本,不提供淋巴細胞分離細胞 淋巴細胞分離+總RNA抽提+逆轉錄+樣本驗證 140元/樣本
難勻漿的樣本 需要手工勻漿,如軟骨組織,眼角膜,皮膚等 處理附加費+總RNA抽提+逆轉錄+樣本驗證 120元/樣本
RNA樣本 需提供RNA 檢測濃度和純度; RNA 逆轉錄+CDNA樣本驗證 40元/樣
CDNA 樣本   樣本預驗證費用 10元/樣本
       
QPCR檢查費 實驗重復 實驗費用  
樣本數<5 雙重復數據(單基因) 300元  
樣本數<4 三重復數據(單基因) 300元  
樣本數≥5 雙重復數據(一個標本一個基因) 65元  
樣本數≥4 三重復數據(一個標本一個基因) 80元  
引物設計驗證 QPCR費用大于300元(免費) 0元

全套技術服務
您只需提供組織或細胞標本,我們為您完成RNA抽提,cDNA制備,實時定量PCR,標準曲線制備及數據分析的所有步驟。  

【您只需提供】

組織
或,高濃度的Total RNA
或,樣品的cDNA
基因序列、來源等背景資料
 
【我們向您提供】 
實驗材料、儀器、方法、步驟
供發表的引物序列、擴增曲線、熔解曲線
原始實驗數據和計算好的正式實驗數據
免費實驗培訓、技術支持
 
 
BioTNT Real time PCR技術服務風險說明和客戶承諾書
 
尊敬的客戶,您好:
    非常感謝您采用BioTNT real time PCR 技術服務。使用本服務前,請您詳細閱讀本說明,希望能夠對您的實驗有所幫助。
科學研究存在一定風險,為了保障您的實驗可以順利完成,科研經費能夠合理應用,BioTNT在長期的科研服務過程中,積累了大量的實踐經驗,并建立了較為科學,合理的實驗流程體系;real time PCR 實驗為例,BioTNT經過與不同實驗單位的科研合作,總結了以下對實驗影響較大的因素:

Ø         不同的樣本特性均不同,BioTNT多年來積累了不同樣本的抽提,經驗較為豐富,但是樣本在采集,保存,運輸,抽提等環節都會存在不同的問題或風險,所以在實驗前BioTNT針對樣本情況會跟您溝通,同時也請望您提供部分不重要的樣本以進行預實驗的摸索和測定;

 

Ø         內參的選擇對實驗數據的統計有著重要的作用,BioTNT安排了內參的選擇這一步驟來為您降低實驗和數據統計風險;為了降低整體的經費使用風險,BioTNT的內參驗證,為您的費用使用提供了進一步的依據。

 

Ø         針對大樣本客戶,BioTNT希望通過一步一步的技術服務步驟和分階段的實驗服務,達到有效控制和杜絕經費的浪費。

 

 大樣本客戶:泛指樣本數量超過20個樣本進行基因檢測的客戶;

 

       以下收費和付款方式僅對上海本地客戶有效,非上??突?,必須簽定技術服務合同,并預付50%,BioTNT 安排樣本抽提和預實驗;擴大性預實驗結束后,BioTNT 核算費用,開具剩余發票并請您付清余款。收到全款后BioTNT 會郵寄數據光盤給您。

 

 

BioTNT Real time PCR技術服務主要內容為:
1.         實驗前端:實驗訂單確認,目的基因設計、確認、合成,樣本取樣,樣本抽提; 
BioTNT 會與您進行基因確認,內參選擇和內參驗證,并發送相應的實驗報告;

 

由于您的樣本量比較大,在訂單確認后,BioTNT 會根據您的樣本量,開具樣本抽提費用發票;

2.         實驗中端:樣本的內參篩選,CDNA(樣本)內參驗證,目的基因驗證,預實驗,擴大性預實驗及相關的驗證報告;
a)         對于大樣本的客戶,進行內參篩選非常重要:不同的內參,實驗模型或者用藥都可能會影響內參的含量,故要選擇內參差異性小的作為正式實驗的內參。建議采用內參篩選或者雙內參的實驗模式;
b)        CDNA內參驗證: 內參篩選完成后,BioTNT將對您的CDNA進行一一驗證并出具相關的內參驗證報告;對于內參驗證ct>25CDNA(樣本),BioTNT建議客戶不用做正式實驗數據;
c)         目的基因驗證:BioTNT一般設計兩對引物,采用同類型的樣本驗證目的基因,確保所有目的基因為可用的且效率較高,如目的基因不好BioTNT將免費設計新的引物。
d)        預實驗驗證:隨機抽取2-3CDNA樣本單孔驗證目的基因,確保目的基因為可用的;

 

e)         擴大性預實驗:目的基因驗證完好,我們將跟您溝通選擇5-10個樣本(建議選擇不同組的樣本)進行雙復孔的擴大性實驗,并提供給您正規的數據報告,并確認此實驗結果是否符合您的預期或其他問題請提前溝通。并協商下一步實驗方案。

Ø         BioTNT 承諾提供的正式數據是按照客戶要求的重復方式,并在擴增曲線,融解曲線以及重復性上能達到實驗要求的數據。
Ø         如果擴大性預實驗不符合預期,建議采用分批實驗的方式,請客戶選擇下一批要進行實驗的樣本,并結清本段實驗費用。
Ø         如果擴大性預實驗符合預期,同樣為保險起見,仍建議客戶采用分批實驗的方式,請客戶選擇下一批要進行實驗的樣本,并結清本段實驗費用。
Ø         如果擴大性實驗符合預期,客戶對數據要求比較著急,需要一次性完成下面的實驗,請客戶通過郵件或者書面申明的方式,告知BioTNT,直接進行正式的實驗,并承擔實驗結果可能不符合預期的風險。請客戶結清本段實驗費用,并預先開具剩余金額60%的發票。
3.         實驗末端:正式實驗,實驗數據處理,完整數據報告,實驗相關流程;
根據上一階段與客戶的協商情況,完成剩余實驗,并開具剩余金額的發票。
4.  全額付款后請申請引物序列;
 
 
 
 
 
備注:請您已經了解本次實驗的相關風險,并同意上述條款。

 

 

 

 
品名 貨號 特性 品牌 規格 價格
qPCR總RNA提?。═rizol法) A2010S0401 服務 BioTNT ¥40
qPCR總RNA提?。≦iagen試劑盒) A2010S0402 服務 BioTNT ¥80
qPCR基因組DNA提?。≦iagen試劑盒) A2010S0404 服務 BioTNT ¥80
qPCR mRNA逆轉錄cDNA A2010S0406 服務 BioTNT ¥40
qPCR預實驗(內參驗證) A2010S0407 服務 BioTNT ¥10
qPCR預實驗(目的基因驗證) A2010S0408 服務 BioTNT 基因 ¥10
qPCR mRNA引物設計 A2010S0409 服務 BioTNT 基因 ¥300
qPCR mRNA內參基因檢測(單孔正式實驗) A2010S0411 服務 BioTNT 樣·基因 ¥15
qPCR mRNA內參基因檢測(雙復正式實驗) A2010S0412 服務 BioTNT 樣·基因 ¥30
qPCR mRNA內參基因檢測(三復正式實驗) A2010S0413 服務 BioTNT 樣·基因 ¥45
qPCR mRNA目的基因檢測(單孔正式實驗) A2010S0414 服務 BioTNT 樣·基因 ¥30
qPCR mRNA目的基因檢測(雙復正式實驗) A2010S0415 服務 BioTNT 樣·基因 ¥60
qPCR mRNA目的基因檢測(三復正式實驗) A2010S0416 服務 BioTNT 樣·基因 ¥90
qPCR LncRNA基因檢測 A2010S0420 服務 BioTNT 樣·基因 詢價
引物合成(客戶提供引物序列) A2010S0423 服務 BioTNT 堿基 ¥2
總共 17 條記錄 頁次: [1]   當前第 1 頁/共 1頁   每頁 25條 跳轉到 
技術支持:[email protected]    產品咨詢:[email protected]    售后服務群:47468567
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炉石传说冒险模式有什么奖励 www.jxfkv.icu BioTNT Preci? mRNA qPCR 預驗證引物對

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1. 搜索產品時先要選擇搜索條件:品名搜索和貨號搜索,搜索到產品列表時,可根據產品類別和品牌進行一次篩??;
2. 由于某些產品的英文名較多,可更換關鍵詞搜索;
3. 當進行品名搜索時,切勿將品名和種類同時輸入,否則就有可能搜索不到產品(例如:FAST Frame for Chip Kits - 4 Slide frame 生物芯片,將有可能搜索不到產品或者過多的產品);
4. 如果您需求的產品比較急時,可聯系在線客服,即時為您提供更便捷的服務。